Informe preliminar del ensayo para replicar las células madres de la superficie ocular.
Diversas patologías oculares que afectan el limbo esclero-corneal producen pérdida de la visión por falta de producción del epitelio fenotípicamente corneal, que es reemplazado por epitelio conjuntiva y células calicifomes, secretoras del film mucoso lagrimal.
Para el cultivo de las células primordiales de la superficie ocular se tomaron muestras del anillo esclero-corneal de una córnea de banco de tejidos y, luego, la trepanación para la obtención del botón corneal a ser implantado en el ojo de un paciente que se hallaba en lista de espera del CUADIO.
Respecto al procesamiento y cultivo, las muestran se recibieron y se lavaron con Solución de buffer PBS estéril y luego se disgregaron en piezas pequeñas con bisturí estéril y se trataron con Tripsina durante 15 min a 37C. La suspensión de células resultantes y las piezas se sembraron en placas de cultivo conteniendo medio DMEM:F12 (GIBCO) suplementado con B27 (GIBCO) y factores de crecimiento FGF y EGF (SIGMA) siguiendo procesos de la bibliografía y propios del laboratorio (Montaner et al 2018, Magaquian et al 2021 y Delgado et al 2023). Todo el procedimiento se realizó en flujo laminar BSLa.
Los cultivos se incubaron es estufas gaseadas CO2(5%) y a 37C por 20 días. Cada tres días el medio se suplementó con factores de crecimiento.
Diariamente, se observaron en microscopio óptico invertido para visualizar las células, su morfología y la
ausencia de contaminaciones bacterianas.
La conclusión a la que arribó este informe preliminar es que se necesitan realizar un mayor número de ensayos para ajustar las condiciones óptimas de crecimiento de las células madres y anticuerpos específicos para identificar los tipos celulares primarios y determinar si son células madres u otro tipos celulares primarios derivados del cultivo.
Es necesario poder continuar con este ensayo, que permitirá el tratamiento de numerosas patologías de la Superficie Ocular que actualmente no lo tienen, con la consiguiente disminución y pérdida de la visión.
Es importante consignar las felicitaciones recibidas por el Prof. Dr. Jorge Alió, referente en el orden mundial en el Cultivo de Células Madres en Oftalmología.
Por el Prof. Honorario Dr. Alejo Vercesi y la Dra. Claudia Banchio.
